新生兒生后3到5個月左右通過癥狀（陶土色糞便，尿色加深）、體征（黃疸進行性加重、腹腔積液脹大，肝大），以及血清膽紅素動態(tài)測定、膽汁酸定量、脂蛋白-X定量、B超檢查（閉鎖時看不到膽囊或者是有小膽囊，但是在1.5cm以下）等能夠排除膽道閉鎖。

必要時還可進行膽道造影、肝穿刺活檢、經(jīng)皮肝穿刺造影等確定診斷。如果孕期多次超聲均提示膽囊顯示不清，需要考慮有膽道閉鎖的可能，但也可能是正常的新生兒。

考慮膽道閉鎖的胎兒在宮內(nèi)很難診斷，多數(shù)均需產(chǎn)后檢查才能確診。