1.流行病學(xué)資料:應(yīng)注意發(fā)病前4~20天內(nèi)是否去過恙蟲病流行區(qū),是否曾在戶外工作,露天野營或在灌木草叢中坐,臥等,同時,還應(yīng)注意流行季節(jié),當?shù)乇静〉牧餍星闆r等。
2.臨床表現(xiàn):突然發(fā)病,畏寒或寒戰(zhàn),高熱,食欲缺乏,顏面潮紅,淺表淋巴結(jié)腫大,肝脾腫大,斑丘疹,并可發(fā)現(xiàn)特征性焦痂或潰瘍,對懷疑患本病的患者應(yīng)十分注意尋找焦痂或潰瘍,它多位于腫大,壓痛的淋巴結(jié)附近。
3.實驗室檢查:
(1)血象:外周血液白細胞數(shù)多減少或正常,重型患者可稍增高,分類常有核左移現(xiàn)象。
(2)血清學(xué)檢查:
?、偻?斐反應(yīng):
外-斐反應(yīng)亦稱變形桿菌凝集試驗,患者血清中抗恙蟲病立克次體的抗體能與變形桿菌OXK抗原起凝集反應(yīng),為診斷提供依據(jù),病程第1周 末僅少數(shù)(30%左右)陽性,第2周末為75%左右,第3周可達90%左右,效價可達1∶160~1∶1280,第4周即開始下降,至第8~9周多轉(zhuǎn)為陰 性。
?、谘a體結(jié)合試驗:
陽性率較高,特異性較強,且持續(xù)陽性時間較長,可達5年左右,需選用當?shù)囟嘁娭曜骺乖?,也可采用多價抗原,因不同株的恙蟲病立克次體的抗原性可有較大差異。
③免疫熒光抗體試驗:
用間接免疫熒光抗體試驗(indirect immunofluorescent antibody test,IFAT)檢測患者血清中特異性抗體,在病程的第1周末開始出現(xiàn)陽性,第2~3周末達高峰,60天后逐漸下降,但可持續(xù)數(shù)年,有病后10年檢測 仍呈陽性的報告。
?、馨唿c酶免疫測定:
用各種血清型的恙蟲病立克次體或部分蛋白質(zhì)作為抗原,吸附在硝酸纖維膜上作斑點酶免疫測定(dot enzyme immunoassay,dot-EIA),檢測患者血清中各血清型的特異性IgG和IgM抗體,該法敏感度高,特異性強,可區(qū)分各種血清型。
⑤酶聯(lián)免疫吸附試驗與酶免疫測定:
以基因重組技術(shù)表達的恙蟲病立克次體分子量為56×103的蛋白質(zhì)作為抗原,用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme- linked immunosorbent assays,ELISA)與酶免疫測定(enzyme immunoassay,EIA)檢測患者血清中抗恙蟲病立克次體的IgG和IgM抗體,其敏感度為86%~88%,特異性為84%~90%。
(3)病原學(xué)檢查:
①病原體分離:
常用小鼠作恙蟲病立克次體分離,可取患者的血液接種小鼠腹腔,每只接種0.5ml,多在接種后第7~9天發(fā)病,解剖瀕死的小鼠可發(fā)現(xiàn)雙肺充血,水腫,肝,脾,淋巴結(jié)充血腫脹,出現(xiàn)胸腔積液和腹水,取腹水涂片,腹膜,腸系膜,肝,脾或腎印片,干后用吉姆薩染色鏡檢(放大1000~1600倍),可于單核細胞和巨噬細胞的胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)紫紅色,呈團叢狀分 布的恙蟲病立克次體,當一個恙蟲病立克次體侵入細胞后,在適宜的條件下可在局部胞質(zhì)中繁殖為一團,故常呈團叢狀分布,若用抗恙蟲病立克次體抗體作免疫熒光試驗,在熒光顯微鏡下可見細胞內(nèi)有黃綠色的熒光。
②分子生物學(xué)檢查:
根據(jù)恙蟲病立克次體編碼其分子量為56×103的主要表膜蛋白抗原的基因核苷酸序列,有人設(shè)計了各血清型間共同和不同的引物,用套式聚合酶鏈反應(yīng)(nested polymerase chain reaction,nested-PCR)檢測Gilliam,Karp,kato,kawasaki和kuroki五個血清型的相應(yīng)基因,具敏感度高, 特異性強的特點,認為可用于本病的診斷并鑒定血清型。